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TSA 技术

TSA(Thermal Shift assay),是测定蛋白质热转变稳定性的一种技术,可用于大规模筛选特定蛋白的配体。其具体原理为,蛋白质自然状态下,疏水基团隐藏在结构内部。当温度上升时,蛋白质会转化为变性状态,暴露出疏水基团。而暴露出的疏水基团可以与荧光染料Sypro Orange进行结合,并被激发荧光。我们通过检测荧光强度来反映蛋白质的稳定性。澳门威斯人手机官网拥有丰富的TSA实验经验,通量可达到每周数千个样品。

 

不同温度下,因蛋白质暴露疏水基团的量不同,荧光的强度也不同,可以此画出荧光-温度曲线图。

 

 

Fig 1: 蛋白TSA曲线

 

当配体与蛋白质结合时,蛋白质的稳定性增加,导致相同温度下暴露的疏水基团减少,我们需要用更高的温度让蛋白质充分暴露疏水基团,这一操作使得荧光-温度曲线图右移。

 

 

Fig 2: 蛋白+配体TSA曲线