药研生物技术服务
重组蛋白表达与纯化

澳门威斯人手机官网具有四个蛋白质基因工程表达系统,包括大肠杆菌表达系统、昆虫杆状病毒表达系统、哺乳动物悬浮表达系统、酵母表达系统,我们通过齐全的蛋白表达系统,为客户提供高效的蛋白质表达与纯化服务,以供蛋白结构与功能的研究。

服务内容
  1. 质粒构建

    澳门威斯人手机官网提供定制化的基因克隆服务,包括优化密码子、基因合成(外包)及后续克隆等。您只需提供基因模板,发送目标载体和克隆的需求或者提供蛋白序列、核酸序列,我们将根据您要求的具体规格,提供现有或量身定制的服务。此外,我们还可提供后续的蛋白高产表达、纯化及生产等一站式服务。

     

    · 亚克隆服务

    · 定点突变克隆服务

    · 缺失,插入突变克隆服务

    · 质粒抽提(Plasmid Endofree Miniprep、Midiprep、Maxiprep、Megaprep、Gigaprep)

    · 质粒内毒素去除和测定服务

  2. 蛋白高产表达

    大肠杆菌表达

    · 可将构建好的质粒转化到多种商业化菌株中(如BL21(DE3)、BL21(DE3)Gold、BL21(DE3)CodonPlus RIPL、Rosetta等);

    · 可进行不同温度的诱导表达(16℃-37℃);

    · 可选择不同的培养基(LB、TB、2xYT、M9等);

    · 可选择不同的诱导方式(IPTG诱导、阿拉伯糖诱导、自诱导等);

    · 可选择共表达chaperone提高可溶表达;

    · 基于96孔板的高通量表达测试(可测试不同菌株和不同构建的表达差异);

    · 同位素标记蛋白的表达(包括15N标记、15N13C双标记、15N2H双标记、15N13C2H三标记、15N2H双标基础上的13C-Me ILV选择性标记等)。

     

    昆虫杆状病毒表达

    · 制备杆状病毒;

    · Bac-to-Bac系统、Bacmam系统、线性化共转染系统等制备杆状病毒;

    · 提供sf9、HF等细胞的表达优化服务;

    · 提供昆虫细胞悬浮培养大规模表达(1000L/月);

    · 每个月可操作性质粒数量:>200个;

    · 提供BIIC形式病毒的制备、保存及优化表达;

    · 昆虫细胞瞬转实验(InsectSelect BSD System)。

     

    哺乳动物悬浮表达

    · 多种悬浮细胞系的瞬时转染表达和BacMam感染表达的服务:包括Expi293F、ExpiCHOS、Freestyle 293F、Expi293F™ GnTI-细胞等;

    · 哺乳动物细胞悬浮培养服务:包括瞬时转染、病毒感染以及稳转细胞系培养的大规模表达(400L/月);

    · 悬浮细胞的稳定表达细胞株的构建服务:用于蛋白大量生产。

     

    酵母表达

  3. 蛋白纯化

    · 包涵体纯化

    蛋白不可溶表达,通过洗涤包涵体后变性溶解,然后纯化复性(或复性后纯化)得到可溶蛋白。

     

    · 分泌蛋白纯化

    利用信号肽引导外源蛋白表达分泌到细胞外,直接收集细胞上清(培养基)进行纯化。

     

    · 纯化中涉及到的常用修饰

    生物素化(体内或体外)、磷酸化、去磷酸化、去糖基化。

     

    · 纯化中涉及到的酶切

    TEV酶切、Ulp1酶切、PreScission(或3C)酶切、Thrombin酶切、Ek酶切等。

     

    · 纯化中涉及到的其他技术

    Crosslinking、Nanodisc、Fibrillization等。

  4. 蛋白生产

    · 可溶性蛋白的生产

    · 变复性蛋白的生产

    · 分泌蛋白的生产

    · 膜蛋白组装

技术与平台
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